Staphylococcus aureus un stafilokoku infekcijas. Stafilokoku infekciju mikrobioloģiskā diagnostika

Sārmainās fosfatāzes

Vairāk nekā 20% celmu

5-10% celmu

95-100% celmi

S.saprophiticus

27.09.2021

Caurules

100 r pirmā pasūtījuma bonuss

Izvēlēties darba veidu Grāda darbs Kursa darbs Abstrakts Maģistra darbs Referāts par praksi Raksts Referāta apskats Pārbaude Monogrāfija Problēmu risināšana Biznesa plāns Atbildēšana uz jautājumiem Radošais darbs Eseja Zīmējums Kompozīcijas Tulkošana Prezentācijas Rakstīšana Cits Teksta unikalitātes palielināšana Kandidāta darbs Laboratorijas darbs Tiešsaistes palīdzība

Jautājiet par cenu

Stafilokokoze slimnīcās 40-60%

Šobrīd Staphylococcus ģints vairs nepieder pie Micrococcaceae dzimtas (kopš 90. gadu sākuma). Micrococcaceae dzimta nepastāv (jo starp tās sastāvdaļām nav ģenētiskas attiecības). Tie tika apvienoti tikai, pamatojoties uz grampozitīviem aerobiem un fakultatīviem anaerobiem kokiem, sadaloties vairākās plaknēs.

Mikrokoks ir aktinomicītu ģenētiskais radinieks.

Staphylococcus ir Clostridia ģenētiskais radinieks.

Pētījumos par fusobaktērijām, pravotellas, bakteroīdiem (stingri anaerobiem) uz bezskābekļa barotnes, ja nelieto barotni ar antibiotikām (aminoglikozīdiem), tad stafilokoki (un enterobaktērijas) nogalinās visu !!!

Noplicinātas sēšanas metode

Stafilokoki ir fakultatīvi anaerobi. Micrococcus - stingri aerobi

Diferenciācija ir tests ar aerobo un anaerobo glikozes sadalīšanos. Visa Staphylococcus glikoze+ bez gāzes zem vazelīna eļļas. Micrococcus nav.

Staphylococcus - vairāk nekā 30 sugas, ar pasugām - 44. Tos atšķir 33 testi.

Halotolerances robeža ir vide ar 7,5% vai vairāk NaCl.

Micrococcus joprojām pieaug par 6,5%, un tikai Staphylococcus ir augstāks. (HSA - 10% NaCl). Daži 15% NaCl veidi.

Piena-sāls agars - aug mikrokoki, jo zemāk ir NaCl.

Buržujiem ir Čepmena barotne - mannīta-sāls agars (1% mannīts) - 7,5% NaCl. Mannīts = mannīts, kā glicerīns = glicerīns

Staphylococcus mērķtiecīga izolēšana (piemēram, sanitārajos un bakterioloģiskajos pētījumos). Dzeltenīga zona skābes veidošanās dēļ. Kā alternatīvu mums ir JSA.

Tie. ja mēs izolējam kokus uz barotnes ar ≥ 7,5 NaCl, tad tie vienmēr ir glikoze +, jo tas ir Staphylococcus un Micrococcus neaug

Mikrokoku morfoloģija nedaudz atšķiras no stafilokokiem - gan kolonijām, gan šūnām lielāks nekā stafilokoki.

Katram cilvēkam uz ādas ir 7-10 mikrokoku sugas (un tikai apmēram 15 sugas), M. luteus - dominē - lielas dzeltenas kolonijas uz neinhibējošām barotnēm (vecais nosaukums ir gaisa sarkīni, īstie sarkīni neaug aerobos apstākļos !!!). Grama traips vienmērīgi. Kaudzīšu, piezīmju grāmatiņu, paku veidā. Citi ir balti, bezkrāsaini utt. M.livi - emaljas balts. M.cristi - sarkanās kolonijas.

Staphylococcus Gram krāso nevienmērīgi (kalico krāsa). Kopas - biežāk dod S. aureus, un tā kaudzes, tetrads, iepakojumi utt. Stafilokoki no šķidrās stedas - atsevišķi, pāri, kaudzes.

Uz barotnēm bez dzeltenuma S. aureus pigments neveidojas un kolonijas ir pelēkas.

Karotinoīdi nešķīst ūdenī, un vide ap koloniju nekad nenokrāso Staphylococcus un Micrococcus.

Andželīna Hesa - agaru ieviesa medijos 19. gadsimta vidū

Mikrokoks ir arī UPMF - sepse. In vitro jutīgs pret visu. Dzīvniekiem penicilīns - 5 vienības vienā injekcijā - penicilīna izgudrojuma līmenī - ārstē sepsi. Bet to ir ļoti grūti ārstēt in vivo. Sepse pacientiem ar sirds šuntēšanas operāciju. Ja viņi nonāk sirds-plaušu mašīnā.

Planokoks - mūs neinteresē - jūras ūdens un cilvēki nav bīstami

Stomatokoki - 1 suga. Tie aug labi uz KA (viss aug uz KA), bet tie neaug uz sāls barotnēm. Tiem nav īpašas klīniskas nozīmes. UPMF. Ļoti reti izraisa gingivītu un stomatītu (bet biežāk šīs slimības izraisa anaerobi un vīrusi).

S. aureus subsp. aureus

S. aureus subsp. anaerobius - neaug aerobos apstākļos (stingrs anaerobs)

Starp stafilokokiem nav saprofītu - visi oportūnistiskie patogēni. Vairāk nekā 86 nosoloģiskās slimību formas.

S. aureus un S.epidermidis - 45% no visām stafilokokozēm. Saindēšanās ar pārtiku - tikai S. aureus (S. epidermidis - var izraisīt tikai zīdaiņiem). Enterotoksīnus ražo tikai S. aureus.

Katram cilvēkam uz ādas dzīvo 10-12 stafilokoku veidi.

Deguna priekšējās daļas ir galvenais biotops. Uz platības vienību ir visvairāk.

S. epidermidis kopā ar S. aureus var izraisīt arī nozokomiālo infekciju uzliesmojumus.

Jaundzimušajiem: S. epidermidis konjunktivīts agrāk Maskavā 70. gados; slimnīcas pneimonija S. epidermidis tagad.

Plazmīdas tiek pārnestas ar ātrumu aptuveni 2 stundas (2 stundas Staphylococcus aureus atradās uz citas personas ādas un saņēma jaunu plazmīdu).

Pārnēsāšana.

Dzemdību iestādēs plānveida pētījums par staphylococcus aureus netiek veikts (tikai uzliesmojumu gadījumā) - 345. pasūtījums. Ķirurģiskajam profilam joprojām ir pasūtījums 720 (tas netiek veikts nekur pasaulē). Stafilokoku infekciju skaits ir vienāds starp “buržuāziem” un pie mums, neatkarīgi no sanitārijas.

Ar testu sistēmām var atšķirt līdz 12-15 stafilokoku un vairāku veidu mikrokoku veidiem.

Pasūtījums 691 - par dzemdību namiem atcelts. Jaunajā 345. kārtībā nav bakterioloģiskās daļas, tāpēc bakterioloģijā joprojām visi vadās pēc 691. rīkojuma.

Plānotā skrīnings stafilokoku pārnēsāšanai ir atcelts.

Pašlaik ir 5 koagulāzes pozitīvu stafilokoku veidi.

koagulāze		maltoze	flokulācija	Hemolīze uz KA ar cilvēka asinīm
	H/D diena			gandrīz 100%
			± mazāk nekā 50%

H/h nakts

S. aureus nedod koagulāzi ļoti reti – ar primārajām kultūrām no pacienta ar masīvu antibiotiku terapiju. Tāpēc mēs pārnesam uz aplodu un pēc tam atkal liekam plazmu. Ja nē, tas nav S. aureus.

Pigments uz barotnes ar augstu olbaltumvielu saturu un gaismu (HSA, seruma barotne ar proteīnu)

Starp koagulāzes negatīvajiem stafilokokiem daži var veidot arī pigmentu. S promagenes - veido dzeltenu pigmentu uz jebkura barotnes

Acetoīns = acetilmetilkarbinols - VP reakcija (Voges-Proskauer)

Viņa barotne ar glikozi ir pusšķidra. Sējot no sāļās vides, tie vienmēr ir glikozes pozitīvi, vismaz kolonnas augšējā daļā.

Galīgā negatīvā atbilde uz pusšķidru His barotni ar glikozi tiek izsniegta tikai 5. dienā.

Ja gāze - pieņemam, ka tas ir jaukts vai nav stafilokoks vispār.

Pusšķidra barotne ar mannītu tika izslēgta 1974. gadā - galīgā negatīvā atbilde bija tikai 5. dienā. Tas tiek likts tikai uz krūzes - atbilde ir no rīta.

Cieta barotne ar glicerīnu (1%) (var aizstāt ar jebkuru cukuru un spirtu). Šķidrās un pusšķidras barotnes diferenciācijai Staphylococcus un Micrococcus ģinšu ietvaros nekad neizmanto. Indikators - bromtimolzils, pH - neitrāls; vai bromkrezolsarkanais, bromtimola sarkanais. Sēj plāksnēs - līdz 10 kultūrām uz kausu. Radiāla josla - līdz 6 kultūrām vienā plāksnē. Ap stafilokoku – dzeltēšana. Mikrokoki neizmanto glicerīnu.

S. aurecularis uz testa sistēmām dod 95-99% līdzību ar S. aureus, un to var atšķirt tikai pēc plazmas koagulācijas reakcijas.

Koagulāzes negatīvi stafilokoki

Noteiktos apstākļos tie var dot pigmentu.

Stafilokokus nav iespējams atšķirt pēc sugas ar 1-2 testiem.

Tas aug plazmā mannīta + pārslu veidā, tikai 6-7 sugas.

100% S. aureus ir hemolītiska aktivitāte.

S. saprophiticus sastopams ļoti reti. Cistīts un uretrīts jaunām sievietēm - jutīgas pret antibiotikām un ķīmijterapiju

Koagulāzes negatīvs nevar kļūt par koagulāzes pozitīvu.

S. epidermidis nekad nav koagulāzes pozitīvs, neatkarīgi no tā, kāds rīkojums ir teikts 720

Šūna bez sporām var dzīvot 10-12 dienas.

Sārmainā fosfatāze ir raksturīga tikai S. epidermidis.

Sārmainā fosfatāze - paranitrofenola fosfāts vai fenolftaleīna fosfāts no ALP testiem bioķīmijā - 50 mg uz 100 ml agara līdz 20 celmiem uz plates.

Paranitrofenolfosfāts → paranitrofenols (dzeltens) un barotnes krāsa ir citrondzeltena.

Fenolftaleīna fosfāts → fenolftaleīns (bezkrāsains). Sārminām ar 3-10% amonjaka šķīdumu (uzpilinām uz krūzītes vāka) Aveņu kolonijas.

Jūs varat iegādāties 10% fenolftaleīna fosfāta šķīdumu. Uzglabā ledusskapī gadiem. 0,5 ml šķīduma uz 100 ml agara.

S. epidermidis dabiski ir jutīgs pret novobiocīnu.

Lecitovitalāze (dzeltenuma faktors) - starptautiskajā klasifikācijā neizmanto, tikai mūsu valstī.

20-25% S. epidermidis ir lecitināzes pozitīvi.

80% S. aureus – cilvēka izcelsmes – dod lecitovilāzi. Lecitināzes negatīvais S. aureus - no dzīvniekiem.

Var dot arī citi stafilokoki. Tas ir, ja lecitovilāze ir +, tad tā ir 80% S. aureus, 20% citi stafilokoki.

HSA krūzes gaismā - apgaismības zonā (proteāze) - mums tas nav svarīgi.

Duļķainība – kurā dominē lipāzes – arī nav svarīga.

Buržuāziskā asins barotne - no auna eritrocītiem. Tika uzskatīts, ka cilvēka S. aureus celmi ražo tikai α-hemotoksīnu, bet tagad ir arī β-hemotoksīns. To var izjaukt tikai uz auna eritrocītiem.

β-hemotoksīns dienas laikā rada nepilnīgas hemolīzes zonu, un, ja pēc tam ievietosiet to ledusskapī līdz darba dienas beigām, zona pilnībā iztīrīsies.

S. aureus ražo 2 fermentus

1) termolabīlā DNāze (nukleāze) – tā piemīt visiem stafilokokiem un lielākajai daļai citu mikrobu.

2) Termostabila DNāze (nukleāze) - tā ir tikai S. aureus. Neiznīcinās vārot un pat īslaicīgi apstrādājot autoklāvā.

Un pēc mūsu pasūtījumiem tiek noteikta tikai termolabīlā DNāze (nav jēgas).

Karsētā pārtikā (slēpjot PTI faktu) stafilokoks tiek iznīcināts, un toksīni paliek. Pēc termostabilās DNāzes klātbūtnes var noteikt, vai S. aureus bija klāt.

Pēc augsti polimerizētas DNS secības 1-2 mg uz 1 ml barotnes (pH=8,0). Sēšana uz kausa ar plāksnītēm (vai injekcija). 24 stundas. Mēs attīstāmies, piepildot krūzi ar 3N HCl, veidojas DNS nogulsnes ar HCl, un tur, kur DNāze ir nostrādājusi, mēs redzam klīringa zonu. S. aureus tā rādiuss ir 10-12 mm, S. epidermidis rādiuss ir 4-5 mm. Ap caurumu ar nogalināto S. aureus kultūru - 7-8 mm.

S. epidermidis veido tikai termolabilu DNāzi, S. aureus veido abas DNāzes - zona ir lielāka.

Plaši izplatītas stafilokoku infekcijas, sākot ar augšējo elpceļu slimībām, var ietekmēt visu ķermeni. Pārsvarā atsevišķu orgānu bojājuma dēļ krēpas, strutas, asinis, skalojamie nazofaringeālie uztriepes, urīnceļu izdalījumi, pārtikas produkti (galvenokārt piena un konditorejas izstrādājumi), uztriepes no inficētām virsmām, vēmekļi, eksudāti var būt materiāls stafilokoku infekciju izpētei. atlasīti stingri saskaņā ar aspektu noteikumiem.

Materiāla analīzē tiek izmantotas mikroskopiskās, bakterioloģiskās (mikrobu tīrkultūras izdalīšana un to identificēšana) un bioloģiskās metodes.

I. MIKROSKOPISKĀ METODE

Mikroskopiskā metode ir neatkarīga nozīme tikai aseptiskam darbam ar materiāliem, kas ir sterili veselam cilvēkam (piemēram, asinīm, cerebrospinālajam šķidrumam). Stafilokoku noteikšanai šajā gadījumā ir neatkarīga diagnostikas vērtība. Citos gadījumos mikroskopisko metodi izmanto kā provizorisku, indikatīvu. Lietojot to, ir jāpievērš uzmanība mikroorganismu skaitam katrā redzes laukā (stafilokoku slimību gadījumā patogēns var izspiest pārējo mikrofloru un atrasties uztriepes milzīgos daudzumos), klasteri (ar augstu patogenitāti, stafilokoki ir intensīvi sadalīti, indivīdiem nav laika izkliedēties un dot lielus kopas klasteri), atsevišķu indivīdu lielums (patogēnie stafilokoki pārsvarā ir ļoti mazi).

II. BAKTERIOLOĢISKĀ METODE

Bakterioloģiskā metode ir patogēnu tīrkultūras izolēšana un to identificēšana.

Stafilokoki ir vieni no visizplatītākajiem mikroorganismiem. Tie ir sastopami arī veseliem cilvēkiem. Tāpēc, lai diagnosticētu slimību, noteiktu tās stafilokoku raksturu, ir ļoti svarīgi pierādīt izolēto baktēriju patogenitāti. Diagnostikas problēmas risinājums ir cieši saistīts ar šīs infekcijas epidemioloģijas, ārstēšanas un profilakses jautājumu noskaidrošanu. Pamatojoties uz to, bakterioloģiskā metode sastāv no vairākiem posmiem un virzieniem.

Slimības diagnoze ir stafilokoku tīrkultūras izolēšana un tās virulences noteikšana.
Infekcijas avotu identificēšana un iespējamie izplatīšanās ceļi - no dažādiem, bet savstarpēji saistītiem avotiem izolētu stafilokoku fāgu tipēšana.
Izvēle no visvairāk efektīvs veidsārstēšana - kultūru jutības noteikšana pret antibiotikām un terapeitiskajiem bakteriofāgiem, jo īpaši, polivalentais piofāgs, monovalentais stafilofāgs.

Visi iepriekš minētie pētījuma posmi ir atspoguļoti shēmā:

Patogēna tīrkultūras izolēšana jāveic, ņemot vērā tās kultūras īpatnības – halofilitāti (laba attīstība pārmērīga galda sāls satura klātbūtnē, vienlaikus kavējot citu mikrofloru), lielo nepieciešamību pēc olbaltumvielām un ogļhidrātiem. Tas tiek panākts, izmantojot izvēles barotnes, kas vienlaikus veic diferenciāldiagnostikas funkcijas.

STAFILOKOKU UZTURVITĀJU SASTĀVS

7,5% sāls MPA ar pH 7,2-7,4: gaļas ūdens - 100 ml, peptons - 10 g, nātrija hlorīds - 75 g, agars-agars - 20,0. Barotne tiek sterilizēta +100 °C -30 minūtes.
PIENA-SĀLS MPA gatavo no 7,5% sāls MPA, bet izkausētai un atdzesētai līdz 45 °C barotnei pievienojot 10-20% sterilu vājpienu. Pēc tam 3 dienas pēc kārtas 30 minūtes veic frakcionētu sterilizāciju.
ASINIS MPA tiek pagatavots no parastā MPA, pievienojot tam 5% defibrinētas truša vai aitas asinis. Cilvēka asiņu izmantošana ir nepiemērota.

Veicot analīzi, jāņem vērā šādas novirzes no stafilokoku tipiskām īpašībām.

Parastā stafilokoku grampozitivitāte var tikt zaudēta to mainīguma procesā: ja rodas zāļu rezistence, pakļaujoties ultravioletajiem stariem, lizocīms. Tas jāpatur prātā, veidojot uztriepes no asinīm, kultūras no asins MPA.
Pigmentācija pēdējos gados vairs nav stabila stafilokoku pazīme antibiotiku plašās lietošanas un to mainīguma dēļ. Atkārtotas sēšanas laikā pigments var mainīties. Zelta pigments ne vienmēr sakrīt ar patogēna patogenitāti, un balto un citu pigmentu klātbūtne neizslēdz šī stafilokoka dalību slimības etioloģijā.

VIRULENCES GALVENO RĀDĪTĀJU NOTEIKŠANA

Galvenie stafilokoku virulences rādītāji ir hemolītiskā aktivitāte, enzīma plazmas koagulāzes ražošana un nekrotoksicitāte.

Novērtējot kultūru patogenitātes pakāpi, plaši tiek izmantoti Grosa testi, pēc kuriem visus stafilokokus var iedalīt trīs grupās. Pirmajā beznosacījumu patogēno stafilokoku grupā ietilpst baktērijas, kurām ir (asa hemolītiskā aktivitāte, koagulē citrāta plazmu 1-2 stundas un kurām ir izteiktas nekrotizējošas īpašības. Otrā oportūnistisko vai vidēji patogēno stafilokoku grupa ir zīmogi, kas dod nelielu hemolīzi uz agara ar 5%. trušu vai aitu asinīm, kas koagulē plazmu pēc 6 stundām, un, ievadot intradermāli trusis, izraisa apsārtumu un infiltrāciju. Trešajā nepatogēno stafilokoku grupā ietilpst kultūras, kas nehemolizē eritrocītus, nesarecē plazmu un tām nav nekrotizējošas īpašības.

Tādējādi izolētā stafilokoka virulences novērtējums ir balstīts uz visaptverošu trīs patogēnas iedarbības indikatoru pārbaudi.

Tajā pašā laikā ir oficiālas norādes, ka, izolējot stafilokokus no pienskābes produktiem, īpaši tiem, kas ilgstoši uzglabāti ledusskapī, atsevišķas patogenitātes pazīmes var izzust, vienlaikus saglabājot toksīnu veidošanās spēju kopumā. Tāpēc stafilokoki, kuriem nav kādas no patogenitātes pazīmēm, jāuzskata par patogēniem (Erisman Institute 1967. gada instrukcija).

HEMOTOKSĪNA NOTEIKŠANA tiek veikta, tieši inokulējot kultūru uz asinīm MPA, kas satur 5-10% defibrinētas truša vai aitas asinis. Cilvēka asiņu pievienošana nav vēlama, jo stafilokoki, kas izdala alfa-hemolizīnu, neiznīcina cilvēka eritrocītus, un tāpēc spriedums par šī no slima cilvēka izolētā celma patogenitāti būs neuzticams.

Dažreiz stafilokoku mainīguma rezultātā, kā arī ilgstoši uzglabājot kultūras nelabvēlīgos apstākļos, pēdējo hemolītiskā aktivitāte tiek vājināta vai pilnībā izzūd. Lai atjaunotu baktēriju hemolītisko spēju, barotnei, uz kuras tiek pārbaudīta hemotoksicitāte, ieteicams pievienot reducējošu maisījumu ar ātrumu 0,015 g uz katriem 10 ml barotnes. Maisījums sastāv no vienas daļas Na 2 SO 3 (nātrija sulfāta) un divām daļām Na HSO 3 (nātrija bisulfāta). Atjaunojamo maisījumu glabā tumsā un pievieno izkausētai videi ex tempore. Lai saglabātu eksotoksīna hemolītiskumu stafilokoku kultūrā, ieteicams pievienot arī 100 ml piesātināta Na 2 S 2 0 3 šķīduma (reducētājs) un 250 ml piesātināta hidrohinona šķīduma (stabilizators). 100 ml kultūras filtrāta. VI Ioffe ierosina atjaunot hemolītisko aktivitāti, pievienojot tikai 0,1 ml 1% nātrija sulfāta Na 2 SO 3 šķīduma uz katriem 0,4 ml.

PLASMOKOAGULĀZES NOTEIKŠANA tiek veikta, šaurā mēģenē iesējot stafilokoku kultūru ar 0,5 ml 5% truša vai cilvēka citrāta plazmas. Kultūraugus ievieto termostatā uz 6-10 stundām ar rezultātu reģistrēšanu pēc 1, 2, 3 un 6 stundām. Cilvēka asins plazma dod nekonsekventus rezultātus, un donoru plazma ar glikozi un mertiolātu vispār nav piemērota. Ja cilvēka plazmu nav iespējams aizstāt, to lieto tikai pēc 10-kārtīgas atšķaidīšanas ar fizioloģisko šķīdumu.

Līdzās klasiskajai plazmas koagulāzes noteikšanas metodei tiek izmantota arī plazmas koagulācijas reakcija uz stikla vai paātrināta "slaidu pārbaude". Šī metodiskā tehnika ir balstīta uz koagulāzes aktīvo stafilokoku spēju salipt ar asins plazmu un to sarecēt. Koagulāzes negatīvajiem celmiem šīs īpašības nav. Lai veiktu reakciju, ņem pilienu ūdens, tajā suspendē testa kultūru, pēc tam pievieno vienu pilienu atšķaidītas truša vai cilvēka asins plazmas. Pēc 15-60 sekundēm veidojas plazmas receklis. Vēlāka (pēc minūtes) reakcija tiek uzskatīta par apšaubāmu, un reakcija, kas notiek pēc 3 minūtēm, tiek uzskatīta par negatīvu.

NEKROTOKSĪNA NOTEIKŠANA tiek veikta, trušiem intradermāli injicējot 0,2 ml suspensijas, kurā ir 2 miljardi staphylococcus aureus agara kultūras dienā fizioloģiskā šķīdumā. Dzīvniekus uzrauga 24-48 stundas. Kā pozitīva reakcija tiek uzskatīts tikai infiltrāts ar dzeltenīgu centru, tumšu malu un spilgti sarkanu apmali gar perifēriju, kam seko nekroze.

STAFILOKOKU PATOGENITĀTES PAPILDU RĀDĪTĀJU NOTEIKŠANA

HIALURONIDĀZES ENZĪMA NOTEIKŠANA tiek veikta, pārbaudot kultūru uz substrāta, kas satur hialuronskābi. Kā pēdējais tiek izmantots jaundzimušā nabassaites ekstrakts. Lai to izdarītu, nabassaites 3-5 gabalu apjomā, kas savāktas 0,5% karbolskābes šķīdumā, rūpīgi nomazgā no asinīm ar destilētu ūdeni, attīra no asinsvadiem, smalki sagriež un divas reizes izlaiž caur gaļas mašīnā. Tad malto gaļu nosver un aplej ar pusotru tilpumu destilēta ūdens, pēc tam 30 minūtes atstāj istabas temperatūrā, ik pa laikam sakratot. Tad visu šo masu lej piltuvē ar 2-3 kārtām sterilas marles, filtrē, izspiež, uz minūti iemet verdošā ūdenī, kvantitatīvi atbilstot sākotnējam sasmalcināto auklu svaram. Ļaujiet tai vārīties. Šķidrumu ātri filtrē caur dubultu sterilas marles slāni sterilās mēģenēs, un katrā no tām pievieno dažus pilienus hloroforma, lai saglabātu substrātu. Pēc tam mēģenes aizver ar vates aizbāzni un ievieto aukstumā saglabāšanai. Ekstrakts šajos apstākļos saglabājas gandrīz nemainīgs vairākus mēnešus.

Hialuronidāzes testu veic divos posmos. Pirmais no tiem ir hialuronskābes darba devas noteikšana (eksperimentu veic tikai vienu reizi pēc ekstrakta pagatavošanas un atkārto 1-2 reizes mēnesī ilgstošai uzglabāšanai), otrs ir hialuronidāzes noteikšana. enzīms.

Shēma hialuronskābes darba devas un titra noteikšanai
Reaģenti	Caurules un to saturs ml
Reaģenti	1	2	3	4	5	6
Hialuronskābes ekstrakts	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6
Diētisks. ūdens vai fiziska risinājums	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4
Termostatā +37 °C 15 min.
15% etiķa šķīdums. skābes (indikators)	2 k	2 k	2 k	2 k	2 k	2 k
Rezultāts (trombu veidošanās	-	+	+	+ +	+ + +	+ + + +

Mēģenes ievieto termostatā 37 °C temperatūrā uz 15 minūtēm, pēc tam pievieno 2-3 pilienus 15% etiķskābes šķīduma, viegli sakrata, un rezultātus nolasa, veidojoties trombam. Hialuronskābes titrs tiek uzskatīts par tās minimālo daudzumu, kas etiķskābes iedarbībā rada skaidru trombu. Šajā piemērā hialuronskābes substrāta titrs ir 0,2 ml. Tādu pašu daudzumu lieto kā darba devu.

Shēmas kultūru hialuronidāzes aktivitātes noteikšanai, skatīt zemāk.

Visu mēģeņu saturu sajauc, vispirms ievieto termostatā uz 15 minūtēm, pēc tam 5 minūtes aukstumā un pievieno 2-3 pilienus 15% etiķskābes. Hialuronidāzes klātbūtne baktērijās tiek reģistrēta, ja testa paraugā nav recekļa. Kontroles mēģenē vajadzētu parādīties labam trombam, jo šeit ir vesela hialuronskābe.

Lai precīzāk kvantitatīvi noteiktu testa kultūras hialuronidāzes aktivitāti, paraugu ievieto saskaņā ar šādu detalizētu shēmu.

Shēma kultūru hialuronidāzes aktivitātes noteikšanai
Sastāvdaļas	mēģenes
	1	2
	(galvenais paraugs)	hialuronidāzes skābes kontrole
Hialuronskābes ekstrakts darba devā (ml)	0,2 ml	0,2 ml
Filtrāts - enzīms vai 2 miljardi mikrobu suspensijas sāls šķīdumā (ml.)	0,3 ml	-
Destilēt. ūdens vai fiziska šķīdums (ml.)	0,2	0,5 ml
Termostatā +37 °C 15-30 minūtes, pēc tam aukstumā 5 minūtes, lai apturētu fermenta darbību
15% etiķskābes šķīdums	2 pilieni	2 pilieni

Hialuronidāzes aktivitātes kvantitatīvās noteikšanas shēma
Sastāvdaļas ml	mēģenes
	1	2	3	4	5	6
	1	2	3	4	5	hialuronskābes kontrole
Hialuronskābes ekstrakts vergā. deva (ml)	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
Baktēriju suspensija 2 miljardi (ml)	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	-
Destilēt. ūdens vai fiziska šķīdums ml	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6	0,7
Glabājiet termostatā, pievienojiet indikatoru 15% etiķskābi aukstumā
Rezultāts (trombu veidošanās)	-	-	-	+	+	+

Kultūras hialuronidāzes aktivitātes titrs šajā piemērā ir 0,3 ml.

Fibrinokināzes definīcija balstās uz stafilokoku spēju lizēt svaigu asiņu fibrīna recekļus. Testam ņem 0,5 ml ikdienas stafilokoku buljona kultūras, pievieno 0,2 ml svaigas cilvēka plazmas vai asiņu ar 0,8 ml fizioloģiskā šķīduma. Pēc tam uzmanīgi samaisiet, pievienojot 0,5 ml 0,25% kalcija hlorīda šķīduma. Kontrole šajā reakcijā ir mēģene ar visiem tiem pašiem komponentiem, bet bez baktērijām. Caurules ievieto termostatā 37 °C temperatūrā. Pirmajās 15 minūtēs notiek asinsreces. No šī brīža tiek uzraudzīta izveidotā tromba šķīšanas gaita. Parasti patogēnās kultūras nodrošina pilnīgu fibrinolīzi 24 stundu laikā.

KULTŪRU DIFERENCIJA UZ ČAPMANA VIDI. Barotnes sagatavošana: 1 litram 3,5% MPA pievieno 3,3 ml 0,1% genciānas violetas vai kristālvioletas ūdens šķīduma. Sagatavoto barotni lej krūzītēs. Pēc sacietēšanas tam ir pelēcīgi ceriņi. Patogēni stafilokoki uz tā veido purpursarkanas vai oranžas kolonijas, nepatogēnas - baltas vai ceriņi.

PATOGĒNĀ STAFILOKOKU DIFERENCIJA ATTIECĪBĀ AR mannītu tiek veikta uz šķidras Giosa barotnes, kas satur 0,5% daudzvērtīgā spirta - mannīta. Patogēnie stafilokoki mannīts iznīcina pēc 36 stundām, nepatogēns daudz vēlāk. Šis simptoms ir ļoti nestabils un nav neatkarīgs patogenitātes rādītājs.

PAĀTRINĀTA BAKTERIOLOĢISKĀ IZOLĒŠANAS METODE
UN PATOGĒNĀ STAFILOKOKU IDENTIFIKĀCIJA PĒC PĒTERA DANILA

Metodes pamatā ir kompleksa parastā asins MPA izmantošana ar aitas eritrocītiem un barotne ar mannītu, nātrija hlorīdu un kālija telurītu, kuras recepti izstrādāja Petru Danila.

TREŠDIENA PETRO DANIL IR ŠĀDI SASTĀVS: destilēts ūdens-100 ml; peptons - 0,5 g; nātrija hlorīds -10 g; mannīts vai laktoze - 0,5 g; kālija telurīts - 0,5 g; bromtimoblau - 0,004 g.

Vides sagatavošana: siltā ūdenī izšķīdina peptonu, sāli, pievieno 2 ml bromtimolbau šķīduma (0,1 g uz 3,2 ml N/20 nātrija hidroksīda šķīduma un 50 ml destilēta ūdens), sterilizē +120 °C 15 minūtes. Pēc atdzesēšanas pievieno 5 ml 10% mannīta vai laktozes ūdens šķīduma, kas sterilizēts vārot, un 5 ml nātrija telurīta 1% ūdens šķīduma, kas sterilizēts autoklāvā. Barotne ir tumši zaļa, pH -7,6. Kad krāsa ir zila, tai pievieno dažus pilienus 10% sālsskābes. Barotni ielej mēģenēs 1-2 ml.

Petru Danila barotnes dzeltēšana 24 stundas pēc inokulācijas un hemolīze ap stafilokoku kolonijām liecina par patogēno baktēriju izolāciju.

PAĀTRINĀTA VISPĀRĪGA PATOGĒNĀ STAFILOKOKU IDENTIFIKĀCIJA PĒC Pjotra Danila

Patogēno stafilokoku diferenciāciju veic vienā mēģenē. Metodes pamatā ir patogēno stafilokoku spēja aglutinēties cilvēka plazmas klātbūtnē, koagulēt to, kā arī izraisīt homologu eritrocītu aglutināciju. Lai veiktu testu, 1 ml nitrātu cilvēka plazmas pievieno 10 ml fizioloģiskā šķīduma un 0,05 ml eritrocītu masas, kas nostādināta zem plazmas. Mēģeni sakrata un 0,5 ml maisījuma ielej citā mēģenē. Šeit tiek pievienots pēc iespējas vairāk stafilokoku kultūras, ko uzmanīgi noberzē uz mēģenes sieniņas tuvu šķidrajam substrātam, viegli pieskaroties tās virsmai. Berzēšanu turpina, līdz tiek iegūta viendabīga suspensija. Patogēnais stafilokoks tiek aglutinēts ar plazmu, un homogenizācija nenotiek, nepatogēns - veido vienmērīgu viendabīgu masu.

Patogēnie stafilokoki, berzējot kultūru plazmas substrātā, veido granulētu nehomogēnu suspensiju un pēc inkubācijas termostatā izraisa eritrocītu hemaglutināciju un plazmas koagulāciju. Šajā gadījumā nepatogēnie zīmogi veido vienmērīgu duļķainu suspensiju, un plazmas koagulācija un eritrocītu aglutinācija nenotiek.

Tab. 1. Fāgu veidi
Grupa	bakteriofāgi
es	29, 52, 52A, 79, 80
II	3A, 3B, 36, 55, 71
III	6, 7, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A
IV	42D
V	81 un 187

STAFILOKOKU FAGOTIPA NOTEIKŠANA

Dažādās vietās cirkulē dažādi stafilokoku fāgu veidi. Tāpēc to noteikšanai stafilokoku kultūrās ir liela nozīme, lai noskaidrotu iespējamo infekcijas avotu un tā izplatīšanās veidus.

Starp plazmu koagulējošiem stafilokokiem saskaņā ar Starptautiskās fāgu tipēšanas komitejas nomenklatūru izšķir 22 fāgu veidus (1.

Stafilokoku lizējamības noteikšana ar šiem bakteriofāgiem tiek veikta šādi.

KULTŪRU SAGATAVOŠANA FAGOTIPĒŠANAI

Kultūru plazmas koagulācijas spēju noteikšana (bakteriofāgi citē tikai koagulāzes pozitīvus celmus).
Kultūras sagatavošana: noser BCH ar pH -7, 2-7, 4, aug +37 °C 18-24 stundas.
Nākamajā dienā - pārsēšana svaigā BCH ar tādu pašu pH, kultūras audzēšana termostatā 3 stundas.

FAGOTIPĒŠANA

Žāvēt krūzes ar svaigi pagatavotu 1,25% MPA termostatā 1-1,5 stundas.
Ar zīmuli uz stikla sadaliet krūzes dibenu 23-24 kvadrātos, katrā no kuriem atzīmējiet pārbaudāmo bakteriofāgu veidus.
Traukā inokulēt ar 0,2 ml izolēta Staphylococcus aureus 3-4 stundu kultūras un ar lāpstiņu vienmērīgi sadalīt pa barotnes virsmu.
Žāvējiet ražu termostatā +37 ° C temperatūrā 30-45 minūtes.
Katrā kvadrātā ar cilpu uzpiliniet atbilstošā bakteriofāga pilienu desmitkārtīgā atšķaidījumā (1:10), kas iegūts Hotingera buljonā.
Nosusiniet fāga pilienu, ievietojiet krūzes otrādi termostatā uz 18-20 stundām.
Rezultātu uzskaite un stafilokoku fāga veida noteikšana tiek veikta, ja kultūras līzes vietā ir sterils plankums.

Rezultāts tiek uzskatīts par pozitīvu, ja līzes pakāpi nosaka vismaz 2 plus. Šajā gadījumā līzes zona ir aptuveni 50% no platības bakteriofāga lietošanas vietā.

Daudzos gadījumos stafilokoku kultūras tiek lizētas nevis ar vienu, bet gan ar vairākiem fāgiem, veidojot sava veida sterilu plankumu fagomozaīku. Stafilokoki, kuriem ir tāda pati mozaīka vai atšķiras par 1 fāgu, tiek uzskatīti par identiskiem.

BIOLOĢISKĀ METODE

Bioloģiskās diagnostikas metodi izmanto tikai tad, ja ir aizdomas par pārtikas intoksikāciju, ko izraisa enterotropi stafilokoki, kas ražo enterotoksīnu. Tās princips ir saistīts ar pārtikas atlikumu barošanu, par kuru ir aizdomas, ka tā ir inficēta ar Staphylococcus aureus, izolētu kultūru un mazgāšanas ūdeni. Labākais bioloģiskais modelis šajā gadījumā ir 1,5-2 mēnešus veci kaķēni (kultūras pētījumiem) un pieauguši kaķi (ja tiek konstatēts enterotoksīns). Ar pilienveida stafilokoku infekcijām šo metodi neizmanto.

Infekcijas slimību diagnostikas vadlīnijas, red. prof. K. I. Matvejeva un M. I. Sokolovs. 1964, 549.-553., 489.-492.lpp.
Predtechensky B. E. Klīniskās laboratorijas pētījumu rokasgrāmata, 719.-774., 776.-786., 890.-896. lpp.
Djačenko S. S. Mikrobioloģiskās metodes infekcijas slimību diagnosticēšanai, 307.-313.lpp.
Rokasgrāmata bet mikrobioloģija, klīnika un infekcijas slimību epidemioloģija, VI t., sadaļa. VI, 475.-487.lpp.
Dažu infekcijas slimību bakterioloģiskās izmeklēšanas shēmu kolekcija. Metodiskā rokasgrāmata nepilna laika studentu doktoriem-kadetiem, red. prof. P. N. Kaškina, 1965, 4. lpp
Mikrobioloģisko un virusoloģisko pētījumu metožu rokasgrāmata, ed. M. O. Birgers, 1967, 7.-16., 250.-254.lpp.
Vygodchikov GV Stafilokoku infekcijas. Medgiz. 1963. gads.

Avots: Motavkina N.S., Pjanova R.E. Dažu pilienu infekciju un toksoplazmozes mikrobioloģiskā diagnostika. Metodiskā izstrāde skolēniem. VSMU, 1973. gads

Stafilokoku 1878. gadā atklāja R. Kohs un 1880. gadā L. Pastērs strutojošā materiālā. L.Pasters, inficējis trusi, beidzot pierādīja stafilokoka kā strutojošu iekaisumu izraisītāja lomu. Nosaukumu "stafilokoks" 1881. gadā deva A. Ogstons (sakarā ar raksturīgo šūnu izvietojumu), un tā īpašības 1884. gadā detalizēti aprakstīja F. Rozenbahs. Stafilokoki ir grampozitīvas, regulāras ģeometriskas sfēriskas šūnas ar diametru 0,5 - 1,5 mikroni, parasti atrodas klasteru veidā (sk. krāsu ink., 92. att.), katalāzes pozitīvi, reducē nitrātus līdz nitrītiem, aktīvi hidrolizē olbaltumvielas un tauki, fermentē anaerobos apstākļos glikozi, veidojot skābi bez gāzes. Parasti var augt 15% NaCl klātbūtnē un 45°C temperatūrā. G + C saturs DNS ir 30 - 39 mol%. Stafilokokiem nav flagellas un tie neveido sporas. Tie ir plaši izplatīti dabā. To galvenais rezervuārs ir cilvēku un dzīvnieku āda un to gļotādas, kas sazinās ar ārējo vidi. Stafilokoki ir fakultatīvi anaerobi, tikai viena suga ( Staphylococcus saccharolyticus) ir stingra anaeroba. Stafilokoki nav prasīgi pret barotnēm, tie labi aug uz parastajām barotnēm, optimālā temperatūra augšanai ir 35–37 ° C, pH 6,2–8,4. Kolonijas ir apaļas, 2 - 4 mm diametrā, gludām malām, izliektas, necaurspīdīgas, krāsotas izveidotā pigmenta krāsā. Šķidrās kultūras augšanu pavada vienmērīgs duļķainums, un laika gaitā veidojas irdenas nogulsnes. Audzējot parastā barotnē, stafilokoki neveidojas kapsulās, tomēr, sējot ar injekciju pusšķidrā agarā ar plazmu vai serumu, lielākā daļa celmu S. aureus veido kapsulu. Nekapsulārie celmi aug kompaktu koloniju veidā pusšķidrā agarā, bet kapsulārie celmi veido difūzas kolonijas.

Stafilokokiem ir augsta bioķīmiskā aktivitāte: tie rūgst, izdalot skābi (bez gāzes) glicerīnu, glikozi, maltozi, laktozi, saharozi, mannītu; veido dažādus enzīmus (plazmakoagulāzi, fibrinolizīnu, lecitināzi, lizocīmu, sārmaino fosfatāzi, DNāzi, hialuronidāzi, telurīta reduktāzi, proteināzi, želatināzi utt.). Šie fermenti spēlē nozīmīgu lomu stafilokoku metabolismā un lielā mērā nosaka to patogenitāti. Fermenti, piemēram, fibrinolizīns un hialuronidāze, izraisa augstu stafilokoku invazivitāti. Plazmokoagulāze ir galvenais to patogenitātes faktors: tā aizsargā pret fagocitozi un pārvērš protrombīnu par trombīnu, kas izraisa fibrinogēna koagulāciju, kā rezultātā katra šūna tiek pārklāta ar proteīna plēvi, kas aizsargā pret fagocītiem.

Klasifikācija.Ģints Stafilokoks ietver vairāk nekā 20 sugas, kuras iedala divās grupās – koagulāzes pozitīvajos un koagulāzes negatīvajos stafilokokos. Sugu atšķiršanai tiek izmantotas dažādas pazīmes (22. tabula).

22. tabula

Stafilokoku galveno veidu atšķirības pazīmes

Piezīme. (+) - zīme ir pozitīva; (–) – zīme ir negatīva; + (–) – mainīgā zīme;? - nezināms.

I. Koagulāzes pozitīvi stafilokoki:

1.S. aureus***.

2.S. intermedius**.

3.S. hyicusa.

II. Koagulāzes negatīvie stafilokoki:

*Patogēns tikai cilvēkiem.

** Patogēns tikai dzīvniekiem.

*** Patogēns cilvēkiem un dzīvniekiem.

a Ne visi celmi S. hyicus ir koagulāze.

Cilvēkam patogēni galvenokārt ir koagulāzes pozitīvie stafilokoki, taču daudzi koagulāzes negatīvie var izraisīt arī slimības, īpaši jaundzimušajiem (jaundzimušo konjunktivīts, endokardīts, sepse, urīnceļu slimības, akūts gastroenterīts u.c.). S. aureus atkarībā no tā, kurš ir tā galvenais nesējs, ir sadalīts 10 ekovaros ( hominis, bovis, ovis un utt.).

Stafilokokos ir konstatēti vairāk nekā 50 veidu antigēni, pret katru no tiem organismā veidojas antivielas, daudziem no antigēniem piemīt alerģiskas īpašības. Pēc specifikas antigēnus iedala vispārīgajos (kopīgi visai ģints). Stafilokoks); krusteniski reaģējoši - antigēni, kas ir kopīgi ar cilvēka eritrocītu, ādas un nieru izoantigēniem (ar tiem saistītas autoimūnas slimības); sugas un tipam raksturīgie antigēni. Saskaņā ar aglutinācijas reakcijā konstatētajiem tipa specifiskajiem antigēniem stafilokokus iedala vairāk nekā 30 serovaros. Tomēr seroloģiskā metode stafilokoku tipizēšanai vēl nav plaši izmantota. Sugai raksturīgais proteīns ir A, kas veidojas S. aureus. Šis proteīns atrodas uz virsmas, tas ir kovalenti saistīts ar peptidoglikānu, tā MW ir aptuveni 42 kD. A proteīns īpaši aktīvi tiek sintezēts logaritmiskās augšanas fāzē 41 °C temperatūrā, tas ir termolabils, to neiznīcina tripsīns; tā unikālā īpašība ir spēja saistīties ar IgG imūnglobulīnu (IgG 1, IgG 2, IgG 4) Fc fragmentu, mazākā mērā ar IgM un IgA. Uz proteīna A virsmas tika atrasti vairāki reģioni, kas var saistīties ar imūnglobulīna polipeptīda ķēdes reģionu, kas atrodas pie CH 2 un CH 3 domēnu robežas. Šī īpašība ir atradusi plašu pielietojumu koagulācijas reakcijā: stafilokoki, kas noslogoti ar specifiskām antivielām, kuriem ir brīvi aktīvie centri, mijiedarbojas ar antigēnu un nodrošina ātru aglutinācijas reakciju.

A proteīna mijiedarbība ar imūnglobulīniem izraisa komplementa sistēmu un fagocītu disfunkciju pacienta organismā. Tam piemīt antigēnas īpašības, tas ir spēcīgs alergēns un inducē T- un B-limfocītu vairošanos. Tās loma stafilokoku slimību patoģenēzē vēl nav pilnībā noskaidrota.

Celmi S. aureus atšķiras ar jutību pret stafilokoku fāgiem. Rakstīšanai S. aureus izmantojiet starptautisku 23 mērenu fāgu komplektu, kas ir sadalīti četrās grupās:

1. grupa - fāgi 29, 52, 52A, 79, 80;

2. grupa - fāgi 3A, 3C, 55, 71;

3. grupa - fāgi 6, 42E, 47, 53, 54, 75, 77, 83A, 84, 85;

4. grupa - fāgi 94, 95, 96;

ārējās grupas - 81. fāgs.

Stafilokoku saistība ar fāgiem ir savdabīga: vienu un to pašu celmu var lizēt vai nu viens fāgs, vai vairāki vienlaicīgi. Bet, tā kā to jutība pret fāgiem ir samērā stabila iezīme, stafilokoku fāgu tipizēšanai ir liela epidemioloģiska nozīme. Šīs metodes trūkums ir tāds, ka ne vairāk kā 65 - 70% no S. aureus. Pēdējos gados tipizēšanai ir iegūti arī specifisku fāgu komplekti. S. epidermidis.

Stafilokoku patogenitātes faktori. Stafilokoks ir unikāls mikroorganisms. Tas var izraisīt vairāk nekā 100 dažādas slimības, kas pieder pie vienpadsmit klasēm saskaņā ar 1968. gada Starptautisko klasifikāciju. Stafilokoki var ietekmēt jebkurus audus, jebkuru orgānu. Šī stafilokoku īpašība ir saistīta ar to, ka tajos ir liels patogenitātes faktoru komplekss.

1. Adhēzijas faktori - stafilokoku pieķeršanās audu šūnām ir saistīta ar to hidrofobitāti (jo tas ir augstāks, jo stiprākas ir adhezīvās īpašības), kā arī polisaharīdu, iespējams, arī proteīna A adhezīvās īpašības un spēja saistīties. fibronektīns (dažu šūnu receptors).

2. Dažādi enzīmi, kas spēlē “agresijas un aizsardzības” faktoru lomu: plazmas koagulāze (galvenais patogenitātes faktors), hialuronidāze, fibrinolizīns, DNāze, lizocīmam līdzīgs enzīms, lecitināze, fosfatāze, proteināze u.c.

3. Izdalīto eksotoksīnu komplekss:

eritrocīti, nekroze, ievadot intradermāli trusis, leikocītu iznīcināšana, truša nāve, ievadot intravenozi. Taču izrādījās, ka šo efektu izraisa tas pats faktors – membrānu bojājošs toksīns. Tam ir citolītiska iedarbība uz dažādiem šūnu tipiem, kas izpaužas šādi. Šī toksīna molekulas vispirms saistās ar vēl nezināmiem mērķa šūnu membrānas receptoriem vai tās nespecifiski absorbē lipīdi, kas atrodas membrānā, un pēc tam veido sēņu formas heptamēru, kas sastāv no 3 domēniem no 7 molekulām. Domēni, kas veido "vāciņu" un "malu", atrodas uz membrānu ārējās virsmas, un "kājas" domēns kalpo kā transmembrānas kanāls-poras. Caur to notiek mazu molekulu un jonu iekļūšana un izeja, kas izraisa šūnu ar kodolu pietūkumu un nāvi, kā arī eritrocītu osmotisko līzi. Ir atrasti vairāki cilvēka, trušu un aitu eritrocīti, kas bojāti ar membrānām. Nāvējošo efektu trušiem izraisa intravenoza ievadīšana pēc 3-5 minūtēm. Hemolizē cilvēku un daudzu dzīvnieku sugu eritrocītus. Nāvējošs efekts trusis, ja to ievada intravenozi, izraisa pēc 16 - 24 - 48 stundām.Ļoti bieži stafilokokos apm.

b) eksfoliatīvie toksīni A un B izceļas ar antigēnām īpašībām, saistību ar temperatūru (A - termostabils, B - termolabils), to sintēzi kontrolējošo gēnu lokalizāciju (A kontrolē hromosomu gēns, B - plazmīda). Bieži vien vienā celmā S. aureus abi eksfoliatīni tiek sintezēti. Ar šiem toksīniem ir saistīta stafilokoku spēja izraisīt pemfigus jaundzimušajiem, bullozu impetigo, sarkaniem līdzīgiem izsitumiem;

c) īstais leikocidīns - toksīns, kas atšķiras no hemolizīniem ar antigēnām īpašībām, selektīvi iedarbojas uz leikocītiem, tos iznīcinot;

d) eksotoksīns, kas izraisa toksiskā šoka sindromu (TSS). Tam ir superantigēna īpašības. TSS raksturo temperatūras paaugstināšanās, pazemināšanās asinsspiediens, izsitumi uz ādas ar sekojošu lobīšanos uz rokām un pēdām, limfocitopēnija, dažreiz caureja, nieru bojājumi utt. Vairāk nekā 50% celmu spēj ražot un izdalīt šo toksīnu S. aureus.

4. Spēcīgas alergēnas īpašības, kas piemīt gan šūnu struktūras komponentiem, gan eksotoksīniem un citiem baktēriju izdalītajiem atkritumproduktiem. Stafilokoku alergēni var izraisīt gan aizkavēta tipa paaugstinātas jutības reakcijas (DHS), gan tūlītēja tipa paaugstinātas jutības reakcijas (HHS). Stafilokoki ir galvenie ādas un elpceļu alerģiju (dermatīts, bronhiālā astma u.c.) vaininieki. Stafilokoku infekcijas patoģenēzes īpatnība un tendence pāriet hroniskā formā sakņojas GChZ iedarbībā.

5. Krusteniski reaģējošie antigēni (ar eritrocītu A un B izoantigēniem, nierēm un ādu - autoantivielu indukcija, autoimūno slimību attīstība).

6. Fagocitozi inhibējošie faktori. To klātbūtne var izpausties kā ķīmijakses inhibīcija, šūnu aizsardzība pret fagocītu uzsūkšanos, nodrošināt stafilokokiem iespēju vairoties fagocītos un bloķēt "oksidatīvo sprādzienu". Fagocitozi kavē kapsula, proteīns A, peptidoglikāns, teikoīnskābes un toksīni. Turklāt stafilokoki dažās ķermeņa šūnās (piemēram, splenocītu) inducē fagocītiskās aktivitātes nomācēju sintēzi. Fagocitozes inhibīcija ne tikai neļauj organismam attīrīties no stafilokokiem, bet arī traucē T- un B-limfocītu antigēnu apstrādi un uzrādīšanu, kā rezultātā samazinās imūnās atbildes spēks.

Kapsulas klātbūtne stafilokokos palielina to virulenci baltajām pelēm, padara tās izturīgas pret fāgu darbību, neļauj tipizēt ar aglutinējošiem serumiem un maskē proteīnu A.

Teihoskābes ne tikai aizsargā stafilokokus no fagocitozes, bet acīmredzot tām ir būtiska loma stafilokoku infekciju patoģenēzē. Konstatēts, ka bērniem, kas cieš no endokardīta, 100% gadījumu tiek konstatētas antivielas pret teihoskābēm.

7. Stafilokoku mitogēnā iedarbība uz limfocītiem (šāda ietekme ir A proteīnam, enterotoksīniem un citiem stafilokoku izdalītajiem produktiem).

8. Enterotoksīni A, B, C1, C2, C3, D, E. Tiem ir raksturīga antigēna specifika, termiskā stabilitāte, izturība pret formalīnu (nepārvēršas par toksoīdiem) un gremošanas enzīmiem (tripsīns un pepsīns), stabils pH. diapazons no 4, 5 līdz 10,0. Enterotoksīni ir zemas molekulmasas proteīni ar MW no 26 līdz 34 kD ar superantigēnu īpašībām.

Tāpat noskaidrots, ka cilvēkiem ir ģenētiski noteiktas atšķirības jutībā pret stafilokoku infekciju un tās norises raksturu. Jo īpaši smagas stafilokoku izraisītas strutainas-septiskas slimības biežāk tiek konstatētas cilvēkiem ar A un AB asinsgrupu, retāk 0 un B grupas cilvēkiem.

Stafilokoku spēja izraisīt saindēšanos ar pārtiku, piemēram, intoksikāciju, ir saistīta ar enterotoksīnu sintēzi. Visbiežāk tos izraisa enterotoksīni A un D. Šo enterotoksīnu darbības mehānisms ir maz izprotams, taču tas atšķiras no citu baktēriju enterotoksīnu darbības, kas pasliktina adenilāta ciklāzes sistēmas darbību. Visu veidu stafilokoku enterotoksīni izraisa līdzīgu saindēšanās ainu: slikta dūša, vemšana, sāpes aizkuņģa dziedzerī, caureja, dažreiz galvassāpes, drudzis, muskuļu spazmas. Šīs stafilokoku enterotoksīnu īpašības ir saistītas ar to superantigēnajām īpašībām: tie izraisa pārmērīgu interleikīna-2 sintēzi, kas izraisa intoksikāciju. Enterotoksīni uzbudina zarnu gludos muskuļus un palielina kuņģa-zarnu trakta kustīgumu. Saindēšanās visbiežāk saistīta ar ar staphylococcus aureus inficētu piena produktu (saldējums, kūkas, kūkas, siers, biezpiens u.c.) un konservu ar sviestu lietošanu. Piena produktu infekcija var būt saistīta ar govju mastītu vai produktu ražošanā iesaistīto cilvēku strutojošām-iekaisuma slimībām.

Tādējādi dažādu stafilokoku patogenitātes faktoru pārpilnība un to augstās alergēnās īpašības nosaka stafilokoku slimību patoģenēzes īpatnības, to raksturu, lokalizāciju, smagumu un klīniskās izpausmes. Avitaminoze, diabēts, samazināta imunitāte veicina stafilokoku slimību attīstību.

rezistence pret stafilokokiem. No sporas neveidojošajām baktērijām stafilokoki, tāpat kā mikobaktērijas, ir visizturīgākie pret ārējiem faktoriem. Tie labi panes izžūšanu un saglabā dzīvotspēju un virulentību nedēļām un mēnešiem sausos, smalkos putekļos, tādējādi radot putekļu infekciju. Tieša saules gaisma tos nogalina tikai daudzas stundas, un izkliedētā gaisma ir ļoti vāja. Tie ir arī izturīgi pret augstām temperatūrām: karsēšana līdz 80 ° C ilgst apmēram 30 minūtes, sausais karstums (110 ° C) nogalina tos 2 stundu laikā; labi panes zemas temperatūras. Jutība pret ķīmiskajiem dezinfekcijas līdzekļiem ir ļoti atšķirīga, piemēram, 3% fenola šķīdums tos nogalina 15–30 minūšu laikā, bet 1% hloramīna ūdens šķīdums aizņem 2–5 minūtes.

Epidemioloģijas iezīmes. Tā kā stafilokoki ir pastāvīgi ādas un gļotādu iemītnieki, to izraisītajām slimībām var būt vai nu autoinfekcijas raksturs (ar dažādiem ādas un gļotādu ievainojumiem, tai skaitā mikrotraumu), vai eksogēna infekcija, ko izraisa kontaktsadzīve, gaisā. , gaisa putekļu vai pārtikas (ar saindēšanos ar pārtiku) infekcijas metodes.

Īpaši svarīgi ir patogēno stafilokoku pārnēsāšana, jo nesēji, īpaši medicīnas iestādēs (dažādas ķirurģijas klīnikās, dzemdību slimnīcās utt.) un slēgtās grupās, var izraisīt stafilokoku infekcijas. Patogēno stafilokoku pārnēsāšana var būt īslaicīga vai periodiska, bet personas, kurām tā ir pastāvīga (rezidentu pārnēsātāji), ir īpaši bīstamas citiem. Šādiem cilvēkiem stafilokoki ilgstoši un lielā skaitā saglabājas uz deguna un rīkles gļotādām. Ilgstošas pārvadāšanas iemesls nav līdz galam skaidrs. Tas var būt saistīts ar vietējās imunitātes pavājināšanos (sekrēcijas IgA trūkumu), gļotādas disfunkciju, paaugstinātām Staphylococcus aureus adhezīvām īpašībām vai kādu citu tā īpašību dēļ.

Patoģenēzes un klīnikas iezīmes. Stafilokoki viegli nonāk organismā caur mazākajiem ādas un gļotādu bojājumiem un var izraisīt dažādas saslimšanas – no juvenīlām aknēm (akne) līdz smagam peritonītam, endokardītam, sepsei vai septikopēmijai, kurā mirstība sasniedz 80%. Stafilokoki izraisa vārās, hidradenītu, abscesus, flegmonu, osteomielītu; kara laikā - bieži strutojošu brūču komplikāciju vaininieki; stafilokokiem ir vadošā loma strutojošu ķirurģijā. Piemīt alerģiskas īpašības, tās var izraisīt psoriāzi, hemorāģisko vaskulītu, erysipelas, nespecifisku poliartrītu. Stafilokoku infekcija pārtikas produkti ir izplatīts saindēšanās ar pārtiku cēlonis. Stafilokoki ir galvenie sepses vaininieki, tostarp jaundzimušajiem. Atšķirībā no bakterēmijas (baktērijas asinīs), kas ir slimības simptoms un tiek novērota daudzu bakteriālu infekciju gadījumā, sepse (septicēmija - pūšana) ir neatkarīga slimība ar specifisku klīnisko ainu, kuras pamatā ir orgānu bojājumi. retikuloendoteliālā sistēma (mononukleārā fagocītu sistēma – SMF). Ar sepsi rodas strutojošs fokuss, no kura patogēns periodiski nonāk asinsritē, izplatās pa visu ķermeni un ietekmē retikuloendoteliālo sistēmu (RMS), kuras šūnās tas vairojas, izdalot toksīnus un alergēnus. Tajā pašā laikā sepses klīniskā aina ir vāji atkarīga no patogēna veida, bet to nosaka noteiktu orgānu sakāve.

Septikopēmija ir sepses forma, kurā patogēns izraisa strutojošus perēkļus dažādos orgānos un audos, tas ir, tā ir sepse, ko sarežģī strutojošās metastāzes.

Bakterēmija sepses un septikopēmijas gadījumā var būt īslaicīga un ilgstoša.

Pēcinfekcijas imunitāte pastāv, to izraisa gan humorālie, gan šūnu faktori. Svarīga loma tajā ir antitoksīniem, pretmikrobu antivielām, antivielām pret enzīmiem, kā arī T-limfocītiem un fagocītiem. Imunitātes pret stafilokokiem intensitāte un ilgums nav pietiekami pētīts, jo to antigēnā struktūra ir pārāk daudzveidīga un nav krusteniskās imunitātes.

Laboratorijas diagnostika. Galvenā metode ir bakterioloģiska; ir izstrādāti un ieviesti seroloģiskie testi. Nepieciešamības gadījumā (intoksikācijas gadījumā) izmanto bioloģisko paraugu. Bakterioloģiskās izmeklēšanas materiāls ir asinis, strutas, gļotas no rīkles, deguna, brūces izdalījumi, krēpas (ar stafilokoku pneimoniju), fekālijas (ar stafilokoku kolītu), pārtikas intoksikācijas gadījumā - vemšana, izkārnījumi, kuņģa skalošana, aizdomīgi produkti. Materiāls tiek inokulēts uz asins agara (hemolīze), uz piena-sāls (piena-dzeltenuma-sāls) agara (naCl dēļ tiek kavēta svešzemju baktēriju augšana, labāk nosakāms pigments un lecitināze). Izolētā kultūra tiek identificēta pēc sugas pazīmēm, tajā tiek noteikta galveno pazīmju un patogenitātes faktoru klātbūtne (zelta pigments, mannīta fermentācija, hemolīze, plazmakoagulāze), tiek pārbaudīta jutība pret antibiotikām, nepieciešamības gadījumā tiek veikta fāgu tipēšana. No seroloģiskajām reakcijām RPHA un IFM izmanto strutojošu-septisku slimību diagnosticēšanai, jo īpaši, lai noteiktu antivielas pret teihoskābi vai sugai specifiskiem antigēniem.

Lai noteiktu stafilokoku enterotoksigenitāti, tiek izmantotas trīs metodes:

1) seroloģiskais - ar specifisku antitoksisku serumu palīdzību izgulsnēšanās reakcijā gēlā tiek noteikts enterotoksīns un noteikts tā veids;

2) bioloģiskā - stafilokoku buljona kultūras filtrāta intravenoza ievadīšana kaķiem devā 2 - 3 ml uz 1 kg ķermeņa svara. Toksīni kaķiem izraisa vemšanu un caureju;

3) netiešā bakterioloģiskā metode - stafilokoku tīrkultūras izdalīšana no aizdomīga produkta un tā patogenitātes faktoru noteikšana (enterotoksīna veidošanās korelē ar citu patogenitātes faktoru, jo īpaši RNāzes, klātbūtni).

Vienkāršākā un jutīgākā ir seroloģiskā metode enterotoksīna noteikšanai.

Ārstēšana. Stafilokoku slimību ārstēšanai galvenokārt tiek izmantotas beta-laktāma antibiotikas, pret kurām vispirms ir jānosaka jutība. Smagas un hroniskas stafilokoku infekcijas gadījumā pozitīvu efektu dod specifiska terapija - autovakcīnas, toksoīda, pretstafilokoku imūnglobulīna (cilvēka), antistafilokoku plazmas lietošana.

specifiska profilakse. Lai radītu mākslīgo imunitāti pret stafilokoku infekciju, tiek izmantots stafilokoku toksoīds (šķidrums un tabletes), bet tas rada antitoksisku imunitāti tikai pret stafilokokiem, ko lizē galvenokārt I grupas fāgi. Vakcīnu lietošana no nogalinātiem stafilokokiem vai to antigēniem, lai gan tas izraisa pretmikrobu antivielu parādīšanos, bet tikai pret tiem serovariantiem, no kuriem tiek izgatavota vakcīna. Problēma atrast ļoti imunogēnu vakcīnu, kas būtu efektīva pret daudziem patogēnu stafilokoku veidiem, ir viena no svarīgākajām mūsdienu mikrobioloģijas problēmām.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus- fakultatīvi anaerobie grampozitīvi koki, nekustīgi, katalāzes un koagulāzes pozitīvi. Daži celmi S. aureus ražot stafilokoku enterotoksīnus (SE), kas izraisa saindēšanos ar pārtiku. Stafilokoki atrodas gaisā, putekļos, kanalizācija, ūdens, piena, pārtikas produktu, kā arī uz pārtikas ražošanas iekārtām, uz dažādām virsmām iekšā vidi uz cilvēku un dzīvnieku ādas. Cilvēki un dzīvnieki ir galvenais infekcijas avots. Stafilokoki atrodas degunā un rīklē, kā arī uz matiem un ādā vismaz 50% veseliem cilvēkiem. Staphylococcus aureus spēj augt plašā temperatūras diapazonā no 7 līdz 48,5°C (optimālā 30 - 37°C); pH 4,2 - 9,3 (optimālais pH 7,0-7,5) un augstā nātrija hlorīda koncentrācijā (līdz 15% NaCl). Šīs īpašības ļauj baktērijām kolonizēt dažādus pārtikas produktus. Pārtikas produkti, kas visbiežāk saistīti ar stafilokoku saindēšanos ar pārtiku, ir gaļa un gaļas produkti, mājputnu gaļa, olas, salāti (kas satur olas, tuncis, vistas, kartupeļi, makaroni), konditorejas izstrādājumi (piemēram, krējuma pīrāgi, šokolādes eklēri), sviestmaižu pildījumi, piens un piena produkti . Tādējādi produkti, kas gatavošanas laikā tiek manuāli apstrādāti ievērojamu laiku un pēc tam turēti silti, var būt īsts stafilokoku saindēšanās ar pārtiku avots.

Intoksikācija ar stafilokoku infekciju

Tiek ražots slimības cēlonis Staphylococcus aureus toksīnus, tāpēc slimībai raksturīgs ļoti īss inkubācijas periods – parasti no 0,5 līdz 6 stundām. Pacienta uzņēmību pret toksīniem nosaka pacienta stāvoklis, toksīna koncentrācija un apēstā piesārņotā produkta daudzums. Infekciozā deva var būt mazāka par 1,0 µg, kas atbilst aptuveni 100 000 cfu/g produkta. Visbiežāk sastopamie slimības simptomi ir slikta dūša, vemšana, nepatika pret pārtiku, vēdera krampji un caureja. Rehabilitācijas periods parasti ilgst 1-3 dienas, bet smagos gadījumos pilnīga atveseļošanās var aizņemt ilgāku laiku. Slimība netiek nodota citiem, pacientiem jāuzņem liels daudzums šķidruma.

Patogenitāte, slimības mērogs

Koagulozes pozitīvie stafilokoki ir grampozitīvi, katalāzes pozitīvi mikroorganismi, kas veido tipiskas kolonijas uz selektīvās diagnostikas barotnes, kas ir koagulāzes pozitīvas (S. aureus; S. aureus spp. anaerobius) vai truša plazmai specifiskas reakcijas uz truša plazmas fibrinogēna agaru. nosaka ar standarta metodi. Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) ir koagulozei pozitīvi stafilokoki, kas veidojas acetoīns un maltozes raudzēšana aerobos apstākļos šo bioķīmisko testu noteikšanas laikā ar standarta metodi.

Saskaņā ar jaunākajiem pētījumiem attīstītajās valstīs no visām zināmajām infekcijām viena no slavenākajām, "parastajām" baktērijām Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) visbiežāk noved pie nāves, visi koagulāzi ražojošie stafilokoku celmi tiek saukti. zeltaini). Šis nosacīti patogēnais mikroorganisms ir izolēts no 15-30% veselu cilvēku, un vairumā no tiem pārvadāšana ir ierobežota līdz vairākiem mēnešiem. Ja pacientam ir vāja imunitāte, patogēns ir daudzu dzīvībai bīstamu zooantroponotisko infekciju cēlonis. Visbiežāk sastopamā toksiskā stafilokoku slimība ir saindēšanās ar pārtiku. Producē daudzi Staphylococcus aureus celmi enterotoksīns.Šī inde izraisa caureju, vemšanu, sāpes un vēdera krampjus. Saskaņā ar Jaunzēlandes pētījumu, 8,6% bērnu, kas hospitalizēti ar Staphylococcus aureus sepsi, mirst. Dermatovenerologi daudzās valstīs ir nobažījušies par staph infekciju un stafilokoku izraisīto nāves gadījumu skaita pieaugumu. Baktērijas izraisa pārtikas bojāšanos, tostarp tā saukto "nebojājošo" pārtiku. Vaislas, piemēram, cietajā sierā un salami, baktērijas izdala toksīnus. Tie ir visizplatītākais nopietnas saindēšanās ar pārtiku cēlonis. Gatavošanas laikā stafilokoks mirst, bet tā termostabilie toksīni netiek iznīcināti. Stafilokoki ir daudzu cilvēku slimību cēlonis, tostarp sirds (endokardīts un perikardīts), muskuļu un skeleta sistēmas (osteomielīts un infekciozais artrīts). Uz ādas un mīkstajos audos stafilokoks izraisa t.s pārslveida ādas sindroms un celulīts, kas ir visizplatītākās ādas infekcijas slimības. Saskaņā ar PVO datiem Staphylococcus aureus ieņem pirmo vietu to baktēriju sarakstā, kuras visbiežāk tiek inficētas veselības aprūpes iestādēs. Lietojot intravenozus katetru un citas medicīniskās ierīces, kas nonāk saskarē ar stafilokoku infekciju, pastāv augsts risks iekšējā vide organisms. Mākslīgā ventilācija ir arī riska faktors. Stafilokoku infekcija var rasties arī tad, ja tiek pārkāpta parastā higiēnas prakse slimnīcās. Kopumā S. aureus veido aptuveni 30% no visām "slimnīcu infekcijām". Stafilokoki, kas izdzīvo pastāvīgas dezinfekcijas līdzekļu un antibiotiku lietošanas apstākļos, ir visnopietnākais personāla riska faktors, slimnīcas infekcijas pamats.

Taksonomija

Stafilokoki ir sfērisku, nekustīgu, asporogēnu, grampozitīvu, ķīmiski organotrofisku, fakultatīvu anaerobo vai aerobo baktēriju ģints no Micrococcaceae dzimtas. Staphylococcus ģintī ir aptuveni 30 sugas, no kurām 14 ir sastopamas uz cilvēka ādas un gļotādām, t.sk. S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Sugu identifikācijai galvenokārt izmanto 3 testus: plazmas koagulāzes veidošanos, mannīta un glikozes anaerobo fermentāciju. Baktērijas antigēnā struktūra ir sarežģīta, teikīnskābes ir sugai raksturīgi antigēni.

Baktēriju un koloniju morfoloģija

Baktēriju šūnas, kuru diametrs ir 0,5-1,5 mikroni, asimetriski sadalās vairākās plaknēs, veidojot kopas, kas atgādina vīnogu ķekarus. Ir atsevišķas šūnas, pāri un tetrādes. Šūnu siena satur peptidoglikānu un glicerīnskābi. Stafilokoki veido gludas kolonijas, kuras karotinoīdi iekrāso dzeltenā vai oranžā krāsā. Tomēr pigmentācija nav īpaša iezīme. Audzējot uz dzeltenuma-sāls agara, veidojas duļķainas, apaļas, vienmērīgas krēmkrāsas, dzeltenas vai oranžas krāsas kolonijas. Kultivējot šķidrā vidē, baktērijas izraisa to vienmērīgu duļķainību, un pēc tam veidojas irdenas nogulsnes, kas pārvēršas viskozā masā.

Fizioloģiskās un bioķīmiskās īpašības

Stafilokoki ir fakultatīvi anaerobi, bet skābekļa klātbūtnē aug strauji un bagātīgi. Ķīmijorganotrofi ar oksidatīvu un fermentatīvu metabolismu. Bioķīmiskās vielas ir ļoti aktīvas. Tie ražo katalāzi, barotnē ar glikozi anaerobos apstākļos, lielākā daļa celmu veido acetoīnu (pozitīva Voges-Proskauer reakcija). Tie atbrīvo amonjaku augšanas laikā uz argenīna buljona, reducē nitrātus par nitrītiem vai molekulāro slāpekli, aktīvi hidrolizē olbaltumvielas un aerobos apstākļos sadala daudzus ogļhidrātus līdz etiķskābei un oglekļa dioksīdam. Vispārīga iezīme ir glikozes fermentācija anaerobos apstākļos, kas atšķir stafilokokus no mikrokokiem. Baktērijas aug uz bāzes barotnes 37°C (optimālā 35-40°C), bet var augt plašākā temperatūras diapazonā (6,5÷46°C). Augšanas optimums konstatēts pie pH 7,0-7,5, bet augšana iespējama pH=4,2÷9,3 robežās. Tie labi iztur augstu osmotisko spiedienu, tāpēc barotnes ar augstu nātrija hlorīda koncentrāciju - dzeltenuma-sāls vai piena-sāls agars - tiem kalpo par izvēles substrātu. Stafilokoki labi panes izžūšanu, vienlaikus saglabājot virulenci; mirst tiešā saules gaismā 10-12 stundas. Diezgan izturīgs pret karstumu: 70-80 o C temperatūrā tie mirst 20-30 minūtēs, 150 o C - 10 minūtēs; sauss karstums tos nogalina 2 stundu laikā. Baktērijas ir izturīgas pret zemām temperatūrām, atkārtota sasaldēšana un atkausēšana tās nenogalina. Stafilokoki ir mazāk izturīgi pret dezinfekcijas līdzekļu (ūdeņraža peroksīda u.c.) iedarbību, bet izturīgi pret tīra etanola iedarbību. Audzējot aerobos apstākļos, baktērijām ir nepieciešamas aminoskābes un vitamīni, savukārt anaerobos apstākļos ir nepieciešams papildu uracils un papildu oglekļa avoti. Uz asins agara var veidoties vairākas sugas. hemolizīni- vielas, kas ietekmē eritrocītus, leikocītus un citas šūnas. Viņi arī ražo fibrinolizīnu, fosfatāzi, bakteriocīnus; daži celmi ražo koagulāzi, DNāzi, H 2 S un enterotoksīnus (līdz 10 sugām, kam raksturīga letāla, hemolītiska vai nekrotiska iedarbība). Daži ogļhidrāti tiek fermentēti, atbrīvojot skābi bez gāzes. Izturīgs pret lizocīmu, jutīgs pret dažādām antibiotikām. Cilvēkam patogēnām sugām ir viens no 4 toksicitātes faktoriem, piemēram: 1) eksotoksīns, 2) enterotoksīns, 3) leikocidīns, 4) koagulāze (patogenitātes enzīms). Krustenisko rezistenci pret antibiotikām kontrolē R-plazmīda. Uz citiem prokariotiem šis pretestības koeficients tiek pārnests ar transdukciju.

Infekcijas pārnešanas avoti un faktori

Stafilokoki ir oportūnistiski patogēni. Tie ir cilvēku un dzīvnieku normālas mikrofloras pārstāvji - tie blīvi kolonizē dažādus ķermeņa biotopus (ādu, deguna gļotādu un rīkli). mutes dobums, vēdera un paduses reģioni). Stafilokoki organismā nonāk caur ādu un gļotādām ar gaisa pilienu un gaisa putekļu palīdzību. Infekcijas mehānisms parasti ir saistīts ar patogēna pārnešanu no kolonizācijas zonām uz traumēto virsmu (piemēram, ādu). Liela nozīme ir arī ciešiem kontaktiem ar nesējiem un personām, kuras cieš no stafilokoku bojājumiem. Stafilokoks ir izturīgs pret daudzām ārējām ietekmēm, tāpēc tas atrodas ārējā vidē - gaisā (putekļus), augsnē, uz sadzīves priekšmetiem. Stafilokoku infekcijas pārnešanas avoti un faktori ir dažādi. Galvenie avoti ir pacienti ar izdzēstām stafilokoku infekcijas formām vai nēsātājiem, retāk - slimi dzīvnieki, piemēram, (ar pārtikas stafilokoku saindēšanos un enterokolītu) govis ar mastītu. Vislielākās epidemioloģiskās briesmas rada medicīnas darbinieki, kuri var būt staphylococcus aureus slimnīcas celmu nesēji. Stafilokoku infekciju raksturo dažādi mehānismi, ceļi un pārnešanas faktori. baktērijas var tikt pārnestas kontaktpersona izmantojot nesterilu medicīnas instrumentu, medicīniskā personāla rokas, pārtikas ar piena produktiem un konditorejas izstrādājumiem, aerogēno un parenterāli(injicējot).

Patoģenēze

Jutība pret stafilokokiem ir ļoti zema cilvēkiem ar novājinātu imūnsistēmu un palielināta saimniekiem ar novājinātu imūnsistēmu. Ļoti bieži stafilokoku infekcija attīstās uz sekundāro imūndeficītu fona. Patogēna patogenitātes faktori ir mikrokapsula, šūnu sienas komponenti, agresijas enzīmi un toksīni. Mikrokapsula aizsargā baktērijas no fagocitozes, veicina mikrobu adhēziju un izplatīšanos pa audiem. Kad aug iekšā vitro tas neveidojas. Šūnu sienas sastāvdaļas stimulē iekaisuma reakciju attīstību un neitralizē imūnglobulīnus, imobilizē fagocītus. Teicīnskābes izraisa kaskādi komplimentu(imunoloģisko reakciju sastāvdaļa) ar alternatīvu ceļu. Stafilokoku agresijas enzīms koagulāze pastāv trīs antigēnu formās un izraisa asins seruma recēšanu. Vairākos patoloģiskos ķermeņa stāvokļos stafilokoki atstāj savus ierastos biotopus, pārvar audu barjeras un ar asinsriti nonāk ķermeņa iekšējā sterilā vidē. Tur tie izraisa tipisku patoloģisku reakciju – iekaisumu. Tas izpaužas kā dažādas lokalizācijas un smaguma pakāpes strutaini-iekaisuma procesi līdz pat sepsei un septikopēmijai. Stafilokoki ir slimību etioloģiskais faktors, no kuriem lielākajai daļai ir strutaini-iekaisuma raksturs. Baktērijas var inficēt gandrīz visus ķermeņa audus. S. aureus izraisītās infekcijas ir daudzveidīgas un ietver vairāk nekā 100 nozoloģiskās formas, tostarp slimības: 1) āda un zemādas audi(abcesi, kriminālnoziegumi, furunkuloze utt.), 2) elpošanas orgāni(tonsilīts, pleirīts, pneimonija utt.), 3) nervu sistēma un maņu orgāni(meningīts, otitis, konjunktivīts utt.), 4) gremošanas orgāni(stomatīts, peritonīts, enterīts, enterokolīts, pārtikas intoksikācija utt.), 5) muskuļu un skeleta sistēma un saistaudi(artrīts, osteomielīts), 6) asins cirkulācija(endokardīts, flebīts utt.), 7) urīnceļu orgāni(cistīts, mastīts utt.), 8) stafilokoku sepse. Šīs slimības var būt akūtas vai hroniskas. Saindēšanās ar pārtiku klīniski izpaužas vemšanas un ūdeņainas caurejas veidā jau 2-6 stundas pēc inficētu pārtikas produktu - krējuma konditorejas izstrādājumu, konservu, gaļas un dārzeņu salātu u.c.

Atklāšanas metodes

Selektīvās diferenciālās barotnēs, kā likums, aug tikai stafilokoku kolonijas. Pieņemsim, ka slimības stafilokoku etioloģija ļauj izolēt stafilokoku tīrkultūrā. Biomateriāls pētījumiem tiek izvēlēts atkarībā no slimības klīniskā attēla. S. aureus celmiem, kas izolēti no pārtikas stafilokoku intoksikācijas, enterotoksīnu klātbūtni nosaka bioloģiskajos un imunoloģiskajos testos. Tradicionālās metodes provizoriskos rezultātus par stafilokoku infekcijas identificēšanu var iegūt 1-2 dienu laikā.

Klasiskā metode

S. aureus noteikšanas metode balstās uz produkta parauga un/vai tā parauga atšķaidījumu inokulāciju šķidrā selektīvā barotnē, inokulāciju inkubāciju, kultūras šķidruma subkultūru uz agara selektīvās diagnostikas barotnes virsmas, apstiprinājums ar bioķīmiskām pazīmēm, ka izolētās tipiskās un/vai netipiskās kolonijas pieder S. aureus.

38. lapa no 91

PRIVĀTĀ MEDICĪNAS MIKROBILOĢIJA
PATOGĒNIE COCCI
Patogēnie koki, kas izraisa dažādas slimību klīniskās izpausmes cilvēkiem, ir: 1) stafilokoki, 2) streptokoki, 3) pneimokoki, 4) meningokoki un 5) gonokoki.
Pēc tinktūras zīmes (krāsojuma) tos var iedalīt divās apakšgrupās: grampozitīvie koki (stafilokoki, streptokoki un pneimokoki), gramnegatīvie koki (meningokoki un gonokoki).
Visu patogēno koku raksturīga iezīme ir spēja izraisīt strutojošus iekaisuma procesus, tāpēc tos sauc arī par piogēniem (piogēniem) kokiem.
Stafilokokos ir izteiktas asas un pastāvīgi piogēnas īpašības.
STAFILOKOKS
Morfoloģija un tinctorial īpašības. Stafilokoki - Staphylococcus (pirmo reizi izdalīja Pastērs 1880. gadā) ir regulāru bumbiņu forma ar vidējo diametru 0,8-0,9 mikroni. Tīrkultūras uztriepē stafilokoki atrodas kaudžu un puduru veidā, kas atgādina vīnogu ķekaru (60. att.). Strutas un citos patoloģiskajos materiālos bieži var atrast atsevišķus kokus, sapārotas un pat īsas ķēdes. Tie labi krāsojas ar pamata anilīna krāsvielām, ir grampozitīvi, neveido sporas, neveido kapsulas un ir nekustīgi.
Kultūras un bioķīmiskās īpašības. Stafilokoki labi aug uz parastajām barotnēm gan brīvā skābekļa klātbūtnē, gan bez tā. Optimālā temperatūra ir 37 grādi.

Rīsi. 60. Staphylococcus (a) un streptococcus (b) tīrkultūrā.

Rīsi. 61. Staphylococcus kolonijas uz gaļas peptona agara. SW. divdesmit.

Rīsi. 62. Sēšana ar injekciju želatīnā.

Atsevišķas kolonijas uz agara virsmas ir vidēja izmēra apaļi diski, izliekti, mitri, necaurspīdīgi, viendabīgi vai smalkgraudaini (sk. 01. att.). Koloniju krāsa ir atkarīga no stafilokoku radītā pigmenta un var būt zeltaina (Staphylococcus aureus), citrondzeltena (Staphylococcus citreus) un balta (Staphylococcus albus). Sējot ar triecienu uz slīpa agara, veidojas bagātīgs stafilokoku augums, pigmentēts.
Staphylococcus pigmenti ir lipohromi, nešķīst ūdenī un krāso tikai kultūru, bet ne barotni. Pigmentu veidošanās notiek intensīvi, ja mikroorganismi tiek audzēti skābekļa klātbūtnē, istabas temperatūrā, gaismā.
Sējot ar injekciju želatīnā 2.-3. augšanas dienā, uz barotnes virsmas ir pamanāma sašķidrināšanas zona. Kultūrai sašķidrinot, tā nokrīt apakšā kokvilnas nogulumu veidā (62. att.).
Buljonā bagātīgi aug stafilokoki. Pēc 24 stundām termostatā buljons kļūst duļķains un mēģenes apakšā veidojas nogulsnes.
Stafilokoki ātri sarecē pienu, radot skābu reakciju.
Raudzēta (bez gāzes) laktoze, glikoze, maltoze, mannīts. Spēja sadalīt mannītu parasti raksturo staphylococcus aureus patogēnos celmus.
Patogēnie stafilokoki veido kolonijas uz asins agara plāksnēm, ko ieskauj hemolīzes zona un koagulēta citrāta asins plazma.
pretestība. Stafilokoks ir viens no izturīgākajiem mikrobiem. 80° temperatūra to nogalina, kad tas ir mitrs 10 minūšu laikā. 70 ° stafilokoku temperatūra var izturēt līdz 1 stundai. Karbolskābe (3-5% šķīdums) tos nogalina 15-30 minūšu laikā. Strutas gadījumā stafilokoks saglabājas ilgu laiku.
Toksīni, stafilokoku enzīmi, to patogenitāte dzīvniekiem. Patogēni stafilokoki ražo vairākus toksīnus un fermentus. Stafilokoku hemolicīns izšķīdina sarkanās asins šūnas. Šis toksīns ir termolabils (iznīcina 55°C), pieder pie eksotoksīniem, ar to imunizējot dzīvniekus, var iegūt antitoksīnu. Stafilokoku kultūru filtrātam ir arī nekrotiska un letāla iedarbība. Tagad ir pierādīts, ka hemolizīns, nekrotoksīns un letālais toksīns ir viena stafilokoku eksotoksīna sastāvdaļas. Šie toksīni nav atdalāmi viens no otra, un viena no tiem noteikšana kalpo kā pierādījums izolētā staphylococcus aureus patogenitātei. Daži no Staphylococcus aureus hemolītiskajiem celmiem ražo enterotoksīnu, kas izraisa akūtu gastroenterītu. Stafilokoku kultūru filtrātos bieži sastopams leikocidīns – inde, kas iznīcina leikocītus. No enzīmiem patogēnie stafilokoki izdala: 1) plazmokoagulu un z y - koagulējošo plazmu, 2) fibrinolizīnu - fibrīna recekļu šķīdināšanu, 3) hialuronidāzi - šķīstošo hialuronskābi, vielu, kas salīmē saistaudu elementus, 4) penicilināzi - inaktivē 5) penicilināzi. lecitināze - veido duļķainu zonu ap kolonijām uz dzeltenuma-sāls agara (Čistoviča barotne).
No laboratorijas dzīvniekiem truši ir visjutīgākie pret stafilokoku un mazākā mērā jūrascūciņas un pelēm. Trušiem ar intradermālu kultūras injekciju parādās izteikta nekroze, ar subkutānu injekciju attīstās abscesi, un infekcija ar ļoti virulentiem stafilokoku celmiem izraisa sepsi un dzīvnieku nāvi. Pret stafilokoku enterotoksīnu visjutīgākie ir zīdītie kaķēni un jaunas peles.
Stafilokoku klasifikācija. Vecā stafilokoku klasifikācija pēc to izdalītā pigmenta (zelta, balta un citrondzeltena) neļauj pareizi noteikt to patogenitāti. Tāpēc šobrīd Grosa piedāvātā stafilokoku klasifikācija tiek uzskatīta par vispareizāko. Saskaņā ar šo klasifikāciju visi stafilokoki ir sadalīti trīs grupās: patogēni, nedaudz patogēni un nepatogēni.
Pirmā grupa - patogēni stafilokoki:
a) uz plāksnēm ar 5% asins agara veido skaidru hemolīzes zonu;
b) ievadot intradermāli trusis, tie izraisa izteiktu nekrozi, kas dažkārt beidzas ar dzīvnieka nāvi;
c) ražot enzīmu plazmokoagulāzi, kas izraisa plazmas koagulāciju 2 stundu laikā;
d) ir izolēti galvenokārt no pacientiem ar sepsi vai akūtu strutojošu infekciju.
Otrā grupa - vāji patogēni stafilokoki:
a) uz kausiem ar asins agaru veido vieglas nepilnīgas hemolīzes zonu;
b) ievadot intradermāli trusis, injekcijas vietā rodas ādas apsārtums, dažreiz infiltrāts, biežāk bez nekrozes;
c) inokulējot citrāta plazmā, tie izraisa recēšanu 6 stundu laikā un vēlāk;
d) izdalās no ādas virsmas folikulīta gadījumā, no gļotādām augšējo elpceļu katara gadījumā, no brūču virsmas, bet ne no to dziļuma.
Trešā grupa - nepatogēni stafilokoki:
a) uz asins agara plāksnēm nav konstatēta hemolīze;
b) ievadot intradermāli trusis, nekroze un infiltrācija netiek novērota, dažos gadījumos parādās ādas apsārtums;
c) plazmas koagulācijas reakcija ir negatīva;
d) pastāvīgi atrodas uz veselas ādas, uz rīkles, deguna gļotādām un gaisā.
Patoģenēze un slimības cilvēkiem. Stafilokoki ir ļoti izplatīti mikrobi. Tie atrodas gaisā, ūdenī un augsnē, cilvēkiem - gandrīz pastāvīgi uz ādas un gļotādām. Tas izskaidro faktu, ka stafilokoks ir visizplatītākais visu veidu strutošanas izraisītājs. Ādas un gļotādu bojājumi vai to pretestības samazināšanās paver “vārtus” stafilokoku infekcijai.
Visbiežāk tiek ietekmēta āda. Stafilokoki ir furunkulu izraisītāji – strutojošs matu folikulu iekaisums. Ja furunkuls kļūst daudzkārtējs, slimību sauc par furunkulozi. Kad vairāki vāri saplūst kopā, veidojot plašāku strutojošu infiltrātu, rodas karbunkuls.
Stafilokoki ir sastopami abscesos (abscesos), strutojošās brūcēs, gļotādu kataros, septicēmijā un septikopēmijā (sepse ar strutojošu perēkļu veidošanos iekšējos orgānos). Enterotoksiskie Staphylococcus aureus celmi var izraisīt saindēšanos ar pārtiku. Pēdējie tiek novēroti ar stafilokoku inficēta piena un citu piena produktu, krējuma kūku u.c. lietošanas rezultātā, jo šajos produktos stafilokoks atrod optimālus apstākļus savai pavairošanai. Patogēnie stafilokoki pienā var nokļūt gan no govīm, kas slimo ar mastītu, gan no slaucēju rokām, kas cieš no piodermas.
Imunitāte. Cilvēkiem nav iedzimtas imunitātes pret staphylococcus aureus. Taču cilvēkam ir ievērojama rezistence pret šo mikroorganismu, kas skaidrojama ar ādas aizsargājošo lomu un antivielu klātbūtni asinīs.
Acīmredzot var rasties iegūtā imunitāte, par ko liecina antivielu titra pieaugums pacientiem un atveseļotiem pacientiem. Tomēr šī imunitāte ir nestabila. Turklāt ir atzīmēts, ka daudziem cilvēkiem, kuriem ir bijusi furunkuloze, ir paaugstināta jutība pret staphylococcus aureus.
Izturība pret stafilokoku var būt novājināta dažādu iemeslu dēļ - cukura diabēts, traumas, novājinošas slimības utt.
Mikrobioloģiskā diagnostika. Strutas izpēte. Visizplatītākais materiāls mikrobioloģiskajiem pētījumiem ir strutas. Šim nolūkam ar atvērtiem bojājumiem pēc brūces virsmas iepriekšējas tīrīšanas ar sterilu vates tamponu izdalījumi tiek noņemti no dziļākajām brūces vietām. Slēgtos procesos (furunkuls, abscess) tādā pašā nolūkā pēc ādas dezinfekcijas ar sterilu šļirci tiek veikta strutošanas fokusa punkcija. No iegūtajām strutas tiek izgatavotas uztriepes, iekrāsotas ar zilu un gramu un mikroskopētas.
Pēc koku atrašanās vietas un tinktūras īpašībām ir grūti atšķirt stafilokokus un streptokokus, tāpēc tie pāriet uz bakterioloģisko izmeklēšanu, t.i., sēj strutas uz plāksnēm ar vienkāršu, asiņu agaru, uz dzeltenuma-sāls agara (skatīt sadaļu " Sanitārā mikrobioloģija" 454. lpp.) un uz bagātināšanas vidi (cukura buljonu). Sēklu krūzes, apgrieztas otrādi, un buljonu ievieto termostatā 37 ° temperatūrā 1-2 dienas.
Asins agara plāksnēs kolonijas veido hemolīzes zonas, kas bieži ir vairākas reizes lielākas par kolonijas diametru. Šīs skaidrās, bezkrāsainās hemolīzes zonas veidojās sarkano asins šūnu izšķīšanas dēļ, ko izraisīja stafilokoku hemotoksīns. Uz plāksnēm ar dzeltenuma-sāls agaru aug patogēni stafilokoki, veidojot zeltainu pigmentu un duļķainības zonu - zaigojoša vainaga veidā ap koloniju. No vienas kolonijas sagatavo preparātu, iekrāso ar gramu un mikroskopē. Grampozitīvu koku noteikšana preparātā, kas sakārtota vīnogu ķekaru veidā, dod tiesības izdot indikatīvi pozitīvu rezultātu. Atlikušo kolonijas daļu pēc tam subkultivē uz agara slīpuma, lai iegūtu tīru kultūru. Ir nepieciešams diferencēt patogēno Staphylococcus aureus no nepatogēno, t.i., pētīt augšanu uz asins agara, dzeltenuma-sāls agara, inokulēt nitrātu plazmā un noteikt toksicitāti dzīvniekiem.
Plazmas koagulācijas tests. Plazmas koagulācijas reakcijai G. V. Vigodčikovs iesaka šādu metodi. Trusis paņem no sirds 10 ml asiņu, ievieto mēģenē ar 1 ml 5% nātrija citrāta šķīduma. Asinis tiek centrifugētas un plazma tiek aspirēta. Iegūto plazmu pirms eksperimenta atšķaida ar fizioloģisko šķīdumu 1:4 un ielej sterilās mēģenēs pa 0,5 ml. Stafilokoku kolonijas iesēj ar cilpu mēģenēs ar truša nitrātu plazmu, ievieto termostatā 37 ° temperatūrā un plazmas koagulāciju pārbauda ik pēc 2-3 stundām. Patogēni stafilokoki sarecina plazmu 2-10 stundu laikā, visbiežāk 4 stundu laikā.
Toksigenitātes tests. Stafilokoku kultūru toksicitāti nosaka pieredze ar trušiem, bet enterotoksīnu - uz zīdītiem kaķēniem. Mikrobu suspensiju fizioloģiskā šķīdumā sagatavo no stafilokoku agara kārtām uz slīpā agara un nosaka saskaņā ar optisko standartu, aprēķinot 2 miljardus mikrobu ķermeņu 1 ml suspensijas. Truša sānos vai aizmugurē vilnu noplūk un dzīvniekam intradermāli ievada 0,2 ml mikrobu suspensijas. Ar pozitīvu reakciju injekcijas vietā veidojas infiltrāts un pēc tam nekroze.
Lai noteiktu letālu toksīnu, trusim intravenozi injicē stafilokoku buljona kultūras filtrātu ar ātrumu 0,75 ml uz 1 kg ķermeņa svara. Dzīvnieka nāve iestājas pēc 15 minūtēm.
Enterotoksīna noteikšanai kaķēnus 1,5-2 mēnešu vecumā (sver 400 g) baro ar oriģinālo inficēto staphylococcus aureus produktu vai piena kultūru. Saindēšanās pazīmes (caureja, dažreiz vemšana) parādās pēc 30-60 minūtēm. Novērošana tiek veikta 4-6 stundas, un, ja šajā laikā kaķēniem nav nekādas reakcijas, bioloģiskais tests tiek uzskatīts par negatīvu.
Asins pētījums. Ja pacientam ir aizdomas par sepsi, no kubitālās vēnas ar šļirci sterili paņem 10 ml asiņu un inokulē 100-200 ml cukura buljona. Sēju ievieto bagātināšanai uz 24-48 stundām termostatā. Pozitīvā gadījumā barotne kļūst duļķaina, un no tās uztriepes tiek konstatēti grampozitīvi koki, kuriem ir raksturīga forma un atrašanās vieta. Buljonu inokulē asins agara plāksnē un veic turpmāku izpēti, kā aprakstīts iepriekš. Buljonu 10 dienas tur termostatā, ik pēc 2 dienām inokulējot uz 5% asins agara.
Citu materiālu izpēte. Pārbaudot materiālus, kas piesārņoti ar lielu skaitu svešzemju mikrobiem (fekālijām, krēpām), ieteicams izmantot agaru ar 7,5% nātrija hlorīda, kam pievieno 10% siltu vājpienu (Petrovich barotne). Uz šāda agara svešas mikrofloras augšana ir ievērojami nomākta.
Fāgu tipēšana. Fāgu tipizēšanai izmanto tipisku stafilokoku fāgu kopumu, kas sastāv no 21 fāga, kas sadalīts četrās grupās. Katrs tipiskais fāgs spēj vairoties tikai ar atbilstošo stafilokoku celmu. Stafilokoku fāgu tipizācijai ir īpaša nozīme SA-
pārtikas produktu sanitārā un bakterioloģiskā izmeklēšana, lai identificētu infekcijas avotu un noteiktu epidēmijas saiknes.
specifiska terapija un ķīmijterapija. Stafilokoku vakcīnu plaši izmanto atkārtotu un hronisku infekciju, piemēram, furunkulozes, ārstēšanai. Toksoīdu lieto šo slimību profilaksei.
Stafilokoku infekciju ārstēšanā veiksmīgi tiek izmantoti arī sulfanilamīdu sērijas ķīmijterapijas līdzekļi (norsulfazols, sulfodimezīns uc), antibiotikas (penicilīns lielās devās, eritromicīns, oksacilīns utt.), Stafilokoku bakteriofāgs (ādas bojājumiem). Smagas stafilokoku sepses gadījumā ieteicama hiperimūna antistafilokoku plazma un gamma globulīns, kas iegūts no donoriem, kuri imunizēti ar toksoīdu.